Técnica Kirby-Bauer A técnica Kirby-Bauer é um método microbiológico padrão usado para determinar a suscetibilidade de bactérias a agentes antimicrobianos. Envolve medir a zona de inibição do crescimento bacteriano em torno de discos impregnados de antibióticos colocados em uma placa de ágar inoculada com o organismo de teste. Aqui estão as etapas gerais da técnica Kirby-Bauer:
1. Preparação do Inóculo :
- Uma cultura pura da cepa bacteriana de teste é obtida e cultivada em meio de cultura de caldo adequado para atingir a fase de crescimento logarítmico (turbidez).
- A suspensão bacteriana é padronizada para uma turbidez específica, normalmente equivalente a um padrão de turbidez de 0,5 McFarland, para garantir uma densidade de inóculo consistente.
2. Inoculação de placa de ágar :
- Placas de ágar estéreis contendo ágar Mueller-Hinton ou outro meio de ágar apropriado são usadas para o teste.
- Usando um cotonete estéril, o inóculo padronizado é espalhado uniformemente sobre a superfície da placa de ágar para criar uma camada confluente de crescimento bacteriano.
- Deixa-se secar a placa inoculada durante alguns minutos para absorver o excesso de humidade.
3. Aplicação de Discos Antibióticos :
- Discos antibióticos estéreis contendo concentrações específicas de agentes antimicrobianos são colocados na superfície da placa de ágar em intervalos uniformemente espaçados usando uma pinça estéril ou um dispensador de disco.
- Os discos são pressionados suavemente para garantir um bom contato com a superfície do ágar sem danificar os discos.
4. Incubação :
- A placa inoculada com discos de antibióticos é incubada a uma temperatura apropriada (geralmente 35-37°C) durante um período especificado (normalmente 16-24 horas) para permitir o crescimento bacteriano e a difusão de agentes antimicrobianos.
5. Medição de zonas de inibição :
- Após a incubação, as placas são examinadas quanto à presença de zonas de inibição ao redor dos discos de antibióticos.
- Utilizando uma régua ou paquímetro digital, o diâmetro de cada zona de inibição é medido em milímetros.
- O diâmetro da zona indica a suscetibilidade do organismo testado ao antibiótico específico.
6. Interpretação dos Resultados :
- Os diâmetros das zonas medidos são comparados com tabelas ou diretrizes padronizadas, como as fornecidas pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), para determinar a suscetibilidade ou resistência do organismo de teste aos agentes antimicrobianos testados.
- Os organismos são categorizados como suscetíveis, intermediários ou resistentes com base no tamanho das zonas de inibição e nos critérios interpretativos estabelecidos.
7. Controle de qualidade :
- Para garantir a precisão e confiabilidade da técnica Kirby-Bauer, cepas de controle de qualidade com padrões de suscetibilidade conhecidos são incluídas em cada lote de testes para monitorar o desempenho do método e dos reagentes utilizados.
É importante seguir procedimentos padronizados e interpretar os resultados de acordo com as diretrizes estabelecidas para obter informações confiáveis e clinicamente relevantes dos testes de sensibilidade aos antibióticos Kirby-Bauer.